超生迴圈提取靈芝中三萜類化合物的研究

黃書銘[1]，楊新林[1]*，張自強[1]，徐建蘭[2] 朱鶴蓀[3]

1.北京理工大學生命科學與技術學院，北京 100081；

2. 無錫市三聯高科技開發有限公司，江蘇 無錫 214023；

3. 北京理工大學 材料科學研究中心，北京 100081)

摘 要：

目的 研究超聲迴圈技術在靈芝中三萜類化合物提取中的應用。

方法 在常規提取方法的基礎上，增加超生迴圈的處理步驟。

結果 通過試驗對比，超聲迴圈提取所需各種溶劑用量減少，提取時間縮短，目的產物提取率提高了40%。與常規方法提取得到的目的產物之間存在著良好的相關性。

結論 超聲迴圈技術用於靈芝中三萜類化合物的提取具有良好的應用前景。

靈芝在我國已有兩千多年的藥用歷史。近年來，從靈芝的子實體、孢子和菌絲體所提取的三萜類化合物組份（triterpenoid components）已被證實具有抗腫瘤、免疫調節等作用[1~4]。靈芝三萜類化合物的提取方法文獻報導有採用甲醇或乙醇為溶劑提取，提取物經堿處理分出總酸部分再進行分離[5]。該總酸組份（酸溶酸性組份）具有較強的抗腫瘤活性，對肝腫瘤的抑制作用尤為明顯[6]。超聲迴圈技術指在提取過程中使料液迴圈流動的同時施加超聲波，以達到加快提取進程的目的。本實驗將超聲迴圈技術應用到靈芝三萜類化合物的提取工藝中，取得了很好的效果。

1.          材料，超聲迴圈提取設備，RE-52旋轉蒸發儀，惠普1100高效液相色譜儀。靈芝子實

體精粉（赤芝的乾燥子實體）甲醇、醋酸、無水乙醇、三氯甲烷、碳酸氫鈉等均為分析純。 

2.            常規方法提取[7]：稱取粉碎、烘乾的靈芝子實體精粉250g，加入3.75L無水乙醇浸提24小時，濾過，40°~45°減壓濃縮，蒸幹得黑色浸膏8.625g。浸膏溶於250mL氯仿中，加入1.25mL飽和NaHCO3溶液萃取，充分震盪、靜置，收集上層液。下層氯仿部分再加125mL飽和NaHCO3溶液萃取，收集上層溶液。合併堿提液，冷卻至0°，用6mol/?冷鹽酸酸化至PH3~5，酸化液用氯仿-原液（1：1）萃取兩次，收集氯仿溶部分（約1.0L）減壓濃縮，蒸幹，得淡黃色粉狀固體。 

3.          超聲迴圈提取：稱取靈芝子實體精粉250g，按靈芝精粉（g）和無水乙醇（mL）投料比為1：8，在超聲迴圈設備中加入無水乙醇，邊迴圈邊加入靈芝精粉，浸提溫度30°，迴圈速度21r./s。投料結束後施加超聲波浸提，超聲功率800~1000W。全程浸提時間為30min，每次超聲提取時間2s，間歇時間0.5s。用自製裝備濾過靈芝粉渣，料液減壓濃縮至幹。

4.          超聲迴圈萃取：將上一項所得的黑色浸膏12.5g用125mL氯仿迴圈攪拌2min，充分溶解後，再加入等量飽和ＮaHCO3溶液在超聲功率800~1000W，溫度30°，迴圈速度21r/s的條件下，進行超聲迴圈。全程時間12min，工作時間2s。間歇時間0.5s。堿提2次，每次堿提後靜置30min。合併黃色堿提液，在迴圈條件下（速度21r/s）用6mol/L冷鹽酸調PH至3.50~4.00.將酸化液分別用250mL氯仿超聲迴圈萃取2次，迴圈速度21r/s，超聲功率800~1000W，溫度30°，全程供做時間5min，工作時間2s，間歇時間0.5s。萃取2次，每次萃取後靜置30min。收集氯仿層，減壓濃縮，乾燥，得淡黃色固體。

5.          HPLC檢測：精密稱取適量按常規方法和迴圈超聲方法提取的同一批樣品各5份，分別用甲醇配成1mg/mL溶液，0.45μm微孔濾膜濾過，既得。

色譜條件：分析柱，流動相為5%醋酸-甲醇（60：40），檢測波長252nm，進樣量10μL，流速0.8mL/min，柱溫40°。 

結果與討論

結果表明，這兩種提取方法所得產物的HPLC保留時間相關性較好，色譜峰蜂形極其相似。利用超聲迴圈分離靈芝中三萜類化合物的方法，能最大限度地保留原料中的活性組份，提取到的目的產物和常規方法相同。與常規提取方法比較，超生迴圈提取所需3種溶劑的用量均大大減少，乙醇浸體時間葉從24小時縮短到0.5小時。由於採用超聲微循環提取技術，使靈芝藥材中的有效成分得以充分釋放，從而使目標產物的提取率提高，與常規提取方法比較，靈芝浸膏及目的產物提高率分別為44.9%和40%，大大地降低了提取的成本，提高了設備利用率。如表1：

常規方法與超聲迴圈提取靈芝中三萜類化合物的比較 

結論：

將超聲迴圈技術應用到靈芝中三萜類化合物的提取，可以降低生產成本，縮短生產週期，提高產品得率。因此，本實驗所建立的提取工藝具有很好的應用作用前景。 

參考文獻

[1] Zhu H S，Yang X L，Wang L B，et al. Effects of extracts from sporoderm-broken spores of Ganoderma lucidum on HeLa cells[J]. Cell Biol Toxicol，2000，16：201-206.

[2] Hu H B，Ahn N S，Yang X L，et al. Ganoderma lucidum extract induces cell cycle arrest and apoptosis in MCF-7 human breat cancer cell [J]. Int J Cancer，2002，102：250-253

[3] Lin C N，Tome W P，Won S J. Novel cytotoxic principles of Formosan Ganodema lucidum [J]. J Nat Prod，1991，54（4）：998-1002

[4] Koyama K，Imaizui T，Akiba M,et al. Antinociceptive components of Ganoderma lucidum [J]. Planta Med，1997，63(3):224-227

[5] Chen R Y，Yu D Q. Advances of chemical components of triterpenes from Ganoderma lucidum [J]. Acta Pharm Sin (藥學學報)，1990，25（12）：940-953

[6] Yang X L，Wang B W，Huang S M，et al. Effects of ESAC from Ganoderma lucidum on hepatoma growth [J]. China J Cancer Prev Treat (中國腫瘤防治雜誌)，2002，9（5）：152-153

[7] Huang S M，Yang X L，Wang B W，et al. Study on preparation and measurement methods of ESAC from Ganoderma lucidum[J]. China J Chin Mater Med (中國中藥雜誌)，2003，28（4）：332-334