摘 要：
目的 探討靈芝、靈芝孢子和雲芝的抑制作用及其促進小鼠肝癌細胞死亡的方式。
方法 按抗癌藥物篩選常規方法，實驗動物隨機分為5組，除陽性對照組一次性環磷醯胺（CTX，50mg/kg）外，模型對照組（0.5%羧甲基纖維素鈉25mL/kg）、靈芝（8g/kg）組、靈芝孢子（8g/kg）組和雲芝（8g/kg）組均於接種瘤株後24小時開始給藥，連續用藥10天。取各試驗組腫瘤組織電鏡觀察。
結果 與模型對照組相比，靈芝、靈芝孢子和雲芝對小鼠肝癌均有抑制作用，抑瘤率分別為52.1%、73.4%和78.3%，靈芝與靈芝孢子、靈芝與雲芝間抑瘤率差異均有顯著性（P<0.01），但靈芝孢子和雲芝兩者間差異無顯著性（P>0.05）。電鏡結果顯示，靈芝和靈芝孢子組大多數腫瘤細胞腫脹嚴重，電子密度降低，胞膜和核膜的完整性受到損壞，核內染色質呈絮狀凝集。雲芝組多數腫瘤細胞萎縮，胞膜和核膜均完整，核內的染色質濃集。
結論 靈芝和靈芝孢子以促進腫瘤細胞壞死為主，雲芝以促進腫瘤細胞凋亡為主。
靈芝是我國的傳統珍貴中藥，能增強人體免疫力和調節身體各部分機能，靈芝孢子（Ganoderma lucidum spores）是靈芝發育週期中生長成熟期從菌蓋彈射出來的淡霧狀的及其微小的孢子。萌動啟動靈芝孢子是將休眠狀態的靈芝孢子萌動啟動，產生具有活性基因的生物活性物質。有研究表明，靈芝孢子蘊含著比靈芝更豐富的生物活性物質，服用靈芝孢子能顯著增強動物機體的免疫功能，對植物性動物腫瘤有一定的抑制作用。雲芝Polystic-tus versicolor (L.)Fr。也是一種藥用真菌，國內外已有研究報導，從雲芝提取的雲芝多糖具有抑制動物移植性腫瘤細胞生長的作用。以下是研究學家以靈芝、靈芝孢子和雲芝對小鼠肝癌的抑制作用及其促進癌細胞死亡進行實驗觀察的實例：
1.取小動物，雌雄各半；動物肝癌細胞
2.藥品，靈芝提取物、全破壁靈芝孢子和雲芝提取物；環磷醯胺（CTX）；羧甲基纖維素鈉。
對小鼠肝腫瘤生長的影響：無菌條件下抽取7天生長料號的動物肝癌細胞，以注射用生理鹽水稀釋後，將肝癌細胞懸浮液接種於動物的右腋皮下，接種後的小鼠隨即分為5組。靈芝組、靈芝孢子組、雲芝組均於接種瘤株後24小時開始給予相應藥物8g/(kg.d)，連續用藥10天。觀察各組動物的活動狀態、皮毛光澤度。於最後一次給藥後次日，解剖小動物，剪開皮膚暴露腫瘤，稱重計量。計算抑瘤率，以抑瘤率來判斷抑瘤作用。
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組別
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劑量/（g.kg-1）
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動物/只
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體重/g
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瘤品質/g
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抑瘤率/%
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始
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末
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始
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末
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模型
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—
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11
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11
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20.0±0.0
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28.7±4.5
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1.69±0.10
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—
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CTX
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0.05
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11
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11
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20.0±0.0
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28.8±3.3
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0.61±0.34**
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64.2
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靈芝
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8
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10
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10
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20.0±0.0
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28.5±1.6
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0.81±0.09**
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52.1
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靈芝孢子
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8
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10
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10
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20.0±0.0
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27.2±0.8
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0.45±0.08**
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73.4
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雲芝
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8
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10
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10
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20.0±0.0
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29.3±1.1
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0.37±0.07**
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78.3
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注：與模型組比較：**<0.01
由上表可知：靈芝、靈芝孢子和雲芝對動物肝癌均有抑制作用，靈芝孢子和雲芝在抑瘤率上雖有不同，但經統計學處理並無顯著性差異（P>0.05）。
取腫瘤組織，0.5cm×0.5cm大小，放入電鏡固定液（含2%戊二醛）固定2小時，再用1%鋨酸固定1小時。脫水，樹脂包埋。切取超薄切片，裱於220目的銅網上，醋酸軸和檸檬酸鉛雙重電子染色。在H600電鏡下，觀察和拍攝超薄切片的小鼠肝癌細胞超微結構。
通過電鏡觀察到模型組腫瘤細胞基本上為圓形或類圓形。胞膜完整，高爾基體、內質網和線粒體等胞內細胞器，含量豐富，其核膜完整，核大不規整，核漿比例增大，核內常染色質豐富，異染色質少，核仁大，有時可見多個核仁。環磷醯胺組和靈芝組可見大多數腫瘤細胞的胞體腫脹嚴重，胞質的電子密度降低。胞膜消失，胞內物質溢出至細胞間隙。胞質中可見大的空隙和一些中等大小的空泡，線粒體和其他細胞器出現崩潰。核膜的完整性受到損壞，核內染色質呈絮狀凝集。靈芝孢子組大多數腫瘤細胞形態特徵如同靈芝組，但有少數腫瘤細胞仍可見部分胞膜存在，線粒體呈現高度腫脹，核膜較完整，細胞核染色質塊邊集，未出現核碎裂和凋亡小體。雲芝組可觀察到大多數腫瘤細胞的胞體有萎縮現象，但細胞間隙仍屬正常。胞膜和核膜均完整。胞質內細胞器的模型結構均較完整，線粒體腫脹明顯。核膜內陷，形成內脊，核質電子密度高，其中的染色質聚集，呈塊狀。位於核膜上的染色質濃集。然而有少數的腫瘤細胞胞質出現空隙和空泡，細胞器崩解，核膜破裂等結構變化。
討論
靈芝是一種傳統中藥，現已被廣泛用於腫瘤及自身免疫性疾病的輔助性治療[4]。而靈芝孢子是靈芝的精華，其有效成分如多糖類、甾醇類、油酸及亞油酸、三萜類、神經醯胺和一些有機離子均有很強的生物活性。雲芝的主要成分為雲芝多糖，它的有效成分PSK已被分離出，且已證明其具有明顯的抗腫瘤、免疫調節、促進多種細胞因數產生、抗損傷和改善某些老年性疾病症狀等作用。
本研究對靈芝、靈芝孢子、雲芝的抑瘤作用及其促使腫瘤細胞死亡的方式進行了超微結構的比較，結果表明靈芝、靈芝孢子和雲芝均有明顯的抑瘤作用，但靈芝孢子和雲芝的抑瘤作用均優於靈芝。電鏡的觀察結果提示，靈芝、靈芝孢子和雲芝在促使腫瘤細胞死亡的方式上存在不一致性。靈芝、靈芝孢子能促使多數動物肝癌細胞發生壞死的形態學變化，如細胞膜消失，細胞器崩解，胞質中出現大的空隙和一些空泡，核膜不完整，染色質呈絮狀聚集，胞質電子密度較低。但有少數癌細胞出現了凋亡的特徵，如腫脹的線粒體其膜是較完整，胞膜和核膜也是完整的，細胞核發生固縮，核質的電子密度高，其中的染色質聚集，呈塊狀。這種壞死與凋亡共存的現象，有的學者在海馬缺血組織中也發現過同樣的超微結構的改變[5]。然而，雲芝促使多數動物肝癌細胞發生死亡的方式正好與靈芝孢子相反，大多數肝癌細胞的死亡是以凋亡為主，少數肝癌細胞是以壞死方式死亡。這種癌細胞死亡超微結構的差異現象為本實驗首次發現，但其死亡方式的不一致性的具體機制尚未清除，有待進一步的研究。
參考文獻：
[1] Chen X J，Feng C P，Mei C E，et al. Effects of actively germinating Ganoderma apore on the secretion of IL-2 and the transformation and proliferation of mouse splenocyte [J]. Amino Acids Biot Res(氨基酸和生物資源)，2001，23（1）：45-47
[2] Deng L X，Hu B，Chen X J，et al. Study of the germination axtivated Ganoderma spores on teratogenicity，mutagenicity，and antimutagenicity [J]. Carcinog Teratog Mutag(癌變.畸變.突變)，2002，14（3）：183-185
[3] Zhang Q H，Lin Z B.Study on antitumor activity and mechanism of Ganoderma polysaccharides B[J]. Chin J Integrated Tradit Chin West Med (中國中西醫結合雜誌)，1999，19（9）：544-547
[4] Lin Z B. The antiumor actibity mechanism of Ganoderma [J]. Basic Med Sci Clin（基礎醫學與臨床），2000，20（5）：391-393
[5] Zeng Y S，Xu Z C . Co-existence of necrosis and apoptosis in rat hippocampus following transient forebrain ischemia [J]. Neurosci Res，2000，37（2）：113-125
作者簡介：陳小君（1936—），女，廣東揭陽人，教授，主要從事腫瘤學研究，側重抗癌藥物研究。
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