丹參對心肌缺血-再灌注損傷具有氧自由基清楚活性,其精製的提取物(PSME)在體內實驗中防止心肌梗死發生,在體外實驗中對離體大鼠心肌缺血-再灌注損傷具預防作用,但其作用機制不清,限制了世界範圍的應用。採用體外實驗檢測PSME是否具有心血管保護作用。
將動物主動脈平滑肌細胞(VSMC)SV40LT-SMC分為正常對照組(1)、低氧對照組(2)、低氧+0.1mg/mL的PSME組(3)。以LDH從細胞溢出至培養介質中和台盼藍染色法評價細胞存活;以RT-PCR凝膠電泳檢測各組細胞凋亡相關蛋白基因的表達;以免疫組化染色法檢測有關基因表達水準的調節;用TUNEL染色法鑒定凋亡的細胞;用曾報導的方法檢測SOD、CAT、GSH-Px、GST的活性。結果顯示,第1、2、3組的LDH釋放分別為1、2.83、1.6,PSME對LDH釋放產生明顯抑制。台盼藍實驗顯示,PSME組和低氧組的細胞存活率分別為51.5%、30%。比較PSME0.1、1.0mg/mL對細胞存活的作用,結果0.1mg/mL的作用更強。第2組的前細胞凋亡基因Asp53、Bax、Fax表達增強,分別是第1組的1.63、1.53、1.4倍,Bcl-2表達降低,僅為第1組的約1/2;而PSME處理組的前3個基因參數均明顯降低,僅為第1組的0.78、0.82、0.87倍,Bcl-2表達增至第1組的82%。
免疫組化染色實驗未觀察到各組靶基因蛋白產物顯陽性染色。在TUNEL染色實驗中,上述各基因蛋白產物的免疫反應明顯減少,表明PSME具有治療潛力。對心臟的抗氧化酶監測顯示,第2、3組SOD分別為每毫克蛋白0.25、0.488U,CAT分別為每毫克蛋白0.026、0.076μmol/min,表明PSME對SOD、CAT有保護作用。但PSME對GSH-Px、GST無明顯作用。總之,PSME對VSMC顯示心臟保護作用。
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